Válasz:
Ez egy eljárás a különböző fehérjék elválasztására a töltés és kötési tulajdonságok alapján egy anyagra.
Magyarázat:
Különböző pH-értékeken a különböző fehérjék különböző töltésekkel rendelkeznek. A fehérjék egy meghatározott pH-értékű keverékének elhelyezésével különböző töltési tulajdonságokkal rendelkező fehérjéket tartalmazó keverék lehet.
Ha a fehérjék ezt a keverékét egy olyan oszlopra öntjük, amely egy töltőanyagot tartalmazó anyagot tartalmaz, az oszlop az ellentétes töltésű fehérjéket köti össze.
Ezután különböző oldatokat tartalmazhat, amelyek különböző mennyiségű iont tartalmaznak, hogy a fehérjéket az oszlopról eluálják.
Például mondjuk, hogy olyan fehérjék keveréke volt, amelyekből egy adott fehérjét meg akarunk tisztítani. Ha tudta, hogy egy adott pH-nál a kívánt fehérje pozitívan töltődik, akkor a keveréket egy negatív töltésű anyagot tartalmazó oszlopra önthetjük.
Minden olyan fehérje, amely nem töltötte a töltést, vagy ha negatív töltés történt, egyenesen az oszlopon áramlik. Ezután felszabadíthatja a pozitív töltésű fehérjét azáltal, hogy elárasztja az oszlopot pozitív ionokkal, amelyek az oszlop negatív töltését teljesítenék. Ez a verseny ezután az érdeklődésre számot tartó fehérjét idézi elő.
Itt van egy példa erre.
Mindegyik tálca különböző koncentrációjú puffert tartalmaz, és a 175 mM-os mintából (bal felső sarok) látható, hogy a töltéses membránhoz nagyon kevés vörös / barna fehérje kötődik, mivel a pufferben lévő ionok között verseny van és fehérje a membránban lévő töltött kötőhelyekhez (a pufferben lévő ionok "nyertek", mert több van, és így megakadályozták a fehérje kötődését). Az alsó jobb oldali mintában sok fehérje kötődött a membránhoz, mert kevesebb ion van jelen a kötőhelyekért.
Ebben a videóban az anioncserélő kromatográfia működik: