Válasz:
Jellemzően ez egy antitest-specifitási teszt.
Magyarázat:
Egy ELISA-ban nagyon nehéz megmondani, hogy az antitest kötődik-e az érdeklődésre számot tartó fehérjéhez, egy teljesen eltérő fehérjéhez vagy egy sor fehérjéhez.
A Western blot-t az ellenanyag specifitásának ellenőrzésére használjuk (megjegyezzük, hogy a Western blot nem érzékeli az összes keresztreakciót helytelen fehérjékkel).
A Western blot-ban láthatjuk a fehérje méretét, amelyhez az antitest kötődik (nem lehet ELISA-ban). Ezért például, ha az antitestnek 56 kDa-os fehérjéhez kell kötődnie, és ~ 56 kDa-nál nagyobb sávot lát a bloton, akkor ésszerűen biztos lehet abban, hogy az antitest a megfelelő fehérjéhez kötődik.
Ha viszont egy 32 kDa-os sávot láttál, arra a következtetésre juthatsz, hogy az antitest rossz fehérjéhez kötődik. Hasonlóképpen, ha sok sáv jelenik meg a Western blot-on, akkor ez azt sugallná (a fehérje degradáció hiányában), hogy az antitest számos fehérjéhez kötődik.
A gélen megjelenő 32 kDa sáv példájában, valamint a több sávban is azt sugalljuk, hogy az antitest nincs specifikus az ELISA-hoz, és az ELISA-ban megfigyelt eredmények nem specifikusak a kívánt fehérjére.
Ha ezt a fajta tesztet futtatjuk, akkor az I teszt tartalmazhat valamilyen "zavaró" reagenst az antitest tesztelésére. Például, ha az antitestemet egy peptidhez emeltem, az elsődleges antitest oldatban lévő peptidet a helyes kötődés tesztelésére használhatjuk. Ez azt jelenti, hogy a peptid jelenlétében semmilyen sávot vagy eredményt nem kell látnom az ELISA-ból, mivel az elsődleges antitestem nem képes kötődni a peptid feleslege miatt.