Hogyan izolálják a tudósok a DNS-t annak tanulmányozása érdekében?

Hogyan izolálják a tudósok a DNS-t annak tanulmányozása érdekében?
Anonim

Válasz:

Van pár lépés erre, kérjük, figyelmen kívül hagyja a rossz angol nyelvemet, remélem, még mindig megértheti a folyamatot.

Magyarázat:

Ez nem olyan nehéz, mint gondolnád.

Tegyük fel, hogy el akarjuk izolálni a DNS-t egy borjúcsecsemőtől, kövesse ezeket az utasításokat (ugyanolyanok az almához, amennyire tudom, de vannak apró variációk):

  1. Vegyünk 3 darab 3 grammos darabot, és apró darabokra vágjuk, amennyire csak lehetséges.

  2. Tegyük egy keverőbe 75 ml sóoldat-nátrium-citrátot (SSC) egy darabra, és győződjön meg róla, hogy a keverőlapát teljesen be van takarva az SSC-ben, így adjon hozzá egy darab csecsemőmirigyet, ha szükséges.

    Az SSC biztosítja, hogy a sejtmembránok feloldódjanak.

    A keverést addig tartsuk, amíg minden sima.

  3. Tedd egy csőbe a centrifugához, és egy másik csővel rázza meg, hogy a centrifuga ne szakadjon meg

  4. Helyezze a csövet a centrifugába 20 percig 5000 fordulat / perc sebességgel

  5. Amikor a csöveket kihagyja a centrifugából, akkor két összetevőt kell látnia. Az aljzat szilárd anyaggal rendelkezik, ezt pelletnek nevezik, és ez a sejtmagokat a DNS-sel tartja. Látni fogja egy folyékony anyagot is, amelyet felülúszónak neveznek, és ez az SSC az oldott sejtmembránokból áll.

  6. Öntsük le a felülúszót egy folyadékmozgásban, ezt dekantálásnak nevezzük, és ez hagyja a pelletet.

  7. Tegyünk egy kis mennyiségű 2,2 M NaCl-ot a csőbe a pellettel, hogy a pelletet csak NaCl-mal fedjük le. A NaCl a DNS-t körülvevő fehérjéket kicsapja.

  8. Keverjük össze egy üres kémcsővel vagy keverőpálcával. Végül két összetevőt kell kapnia. Az alján levő fehérjék és egy viszkózus folyadék ezen felül.

  9. Vegye ki a viszkózus folyadékot egy pipettával, és győződjön meg róla, hogy nem vesz fel fehérjét a viszkózus folyadékkal. (nagyon kevés fehérje nagyon nehéz elkerülni, de próbálja meg elkerülni a lehető legtöbb fehérjét)

  10. Helyezze a pipettázott viszkózus folyadékot egy főzőpohárba, és adjon hozzá kétszer annyi etanolt. De óvatosan adjuk hozzá az etanolt, mert nem akarod összekeverni a DNS-sel. Az etanol és a viszkózus folyadék közötti interfészen a DNS-buborékok jönnek fel.

  11. Óvatosan keverjük össze egy üvegrúddal, a DNS-t negatív töltéssel töltjük fel, így meg kell ragadnia a rúdhoz.

  12. Tegyük egy kémcsőbe és oldjuk fel az SSC-vel.

Egy speciális gép meg tudja mondani, hogy mennyi DNS-t izoláltál és mennyire tiszta.