Miért használunk negatív kontrollt a PCR-ben?

Miért használunk negatív kontrollt a PCR-ben?
Anonim

Válasz:

Lásd lentebb

Magyarázat:

A PCR egy sablon DNS-ből működik. Tegyük fel, hogy tesztelsz HIV-t (a HIV egy RNS-vírus, de amikor egy sejtbe megy, akkor válik DNS-re… így lesz egy HIV-DNS a fertőzött sejtben). Az általunk használt primerek olyan terméket (amplikon) készítenek, amely megfelel a HIV-DNS egy részének. Ha látja ezt az amplikonot, akkor a HIV-szekvenciája jelen van ….. de ha nincs negatív kontrollja, akkor szennyeződése lehet.

A PCR rendkívül érzékeny. A PCR-ben (víz, puffer, dNTP, enzim) sok megoldást használnak … és mindegyik könnyen szennyezhető más mintákból származó DNS-sel, vagy akár a tegnapi reakció során készített amplikonból. Tehát, ha a X-es páciens DNS-mintája van, és a PCR-vel vizsgálja a HIV-t, a PCR-láncindítók az X-es DNS-mintájában (ha az adott HIV-fertőzött) HIV-DNS-t eredményeznek a termékből, vagy leállíthatja szennyeződés. De nem tudja megmondani, hogy a fertőzésből vagy a HIV-ből származik-e a DNS-ben.

Tehát vízzel irányítod. Tube 1: a reakció összes összetevőjét helyezzük, és a DNS-hez csak vizet adunk. Ez a negatív kontroll. SOHA ne erősítse meg itt. A 2-es csőben az összes reakciókomponenset és az X-es beteg DNS-jét helyezzük. Ha itt kap egy terméket (és az 1-es csövön semmi), az X-es beteg valószínűleg a DNS-ben található HIV-DNS-t tartalmaz. Ha kap egy terméket az 1-es és a 2-es csövekben, szennyezési problémája van, és nem tudja megmondani, hogy a beteg a páciens mintájából a betegségből vagy a szennyeződésből származik.

Tehát mindig vízellenőrzést (vizet a DNS helyett) futtat.