Miért használják a DNáz és a lizozim lízis lépéseiben a fehérje tisztítás során?

Miért használják a DNáz és a lizozim lízis lépéseiben a fehérje tisztítás során?
Anonim

Válasz:

A fehérje frakció tisztítása …

Magyarázat:

Ha egy (gyakran specifikus) fehérjét tisztít, meg kell szabadulnia annyira a szemetetől, amennyit csak tudsz, amihez köthető.

Ez attól függ, hogy melyik fehérje van utána, de általában jó ötlet, különösen a előkészítő tisztításra, hogy minél több szennyeződést szabadítson fel.

1:

Mivel a fehérjék általában nagyok, és következésképpen az (ultracentrifugált) frakció alsó sávjaiban jelennek meg, a nukleinsavaktól megszabadulni akarnak, különösen akkor, ha a fehérje, melyet puryfying-nek nevezünk, azokra vonatkozik, mint a Pol1, Fordított transzkriptáz vagy bármely más enzim, amely részt vesz a replikációban / transzkripcióban / transzlációban.

A mintában lévő nukleinsavakat DNS-t használva elválaszthatja: ez teljesen DNS-t hidrolizál az alkotórészekké.

Ne feledje, hogy vannak különböző DNS-ek, amelyek mindegyike különbözik a szubsztrátjuk mechanizmusától és specifitásától. Attól függően, hogy melyik DNS-t használjuk, az is megjelenhet belső- vagy exo- nukleáz aktivitás …

Még több pont, RN-áz alkalmasabb, mivel az RNS általában a fehérjék úszó / frakció tartományán belül van, és kötődik a fehérjéhez.

2:

A lizozim: Olyan enzim, amely legalább két funkcióval rendelkezik:

Deglikozilálja az enzimeket: A véráramban lévő fehérjék többsége glikozilált: ezekhez néhány cukormolekula kapcsolódik. A lizozim eltávolítja a cukormaradványokat.

Az is képes arra, hogy lebontja a Gram-Pozitív baktériumok sejtfalát roncsolják. (ha a fehérjét Gram-pozitív baktériumokból szeretné tisztítani)

Bármilyen lebomlott termék, akár a nukleinsav, akár a cukorhulladék, a "Centrifugacső" felső frakcióiban "könnyebb" úszóképességük miatt fog megjelenni.