Mi a nyugati blotolás?

Mi a nyugati blotolás?
Anonim

Válasz:

Antitestek alkalmazása olyan fehérjék kimutatására, amelyeket SDS-PAGE-val választottunk el, majd membránra vittük át.

Magyarázat:

A sejtek fehérjék keverékét tartalmazzák (több ezer), és ezek szétválaszthatók SDS-PAGE-val.

Az SDS-PAGE-ból származó fehérjéket ezután egy elektromos mező alkalmazásával a gélről a membránra visszük át, amely tipikusan nitrocellulóz vagy polivinilidén-fluorid (PVDF).

A membránt egy primer ellenanyaggal próbáltuk, amely specifikus a kívánt fehérjére. Ezt követően másodlagos antitestet alkalmazunk a primer antitest kimutatására. A szekunder antitest egy olyan markert tartalmaz, amely kémiai reakcióval kimutatható vagy látható sávot ad a membránon, vagy egy olyan jelet, amelyet egy speciális kamera rögzíthet.

Szükség esetén nagy mélységgel bővíthetem ezt a választ, mivel több száz nyugati blotot készítettem karrierem során.